分子克隆是指在生物體外,用重組技術(shù)將特定基因插入克隆載體分子中獲得重組克隆載體,再通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)于適合的活體寄主內(nèi)進行復(fù)制與擴增,然后從篩選好的寄主細胞內(nèi)分離提純目的克隆載體,得到插入DNA的拷貝,最終使目的基因擴增的過程。
主要包括以下幾個方面:
(1)以PCR為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建,如細菌表達載體,酵母表達載體,哺乳動物表達載體,穿梭質(zhì)粒等;
(2)基因突變,包括定點突變,多點突變,基因缺失等;
(3)載體改造;
(4)shRNA載體、siRNA載體和miRNA表達載體的構(gòu)建;
(5)雙熒光素酶報告基因檢測載體的構(gòu)建。
貨號 | 項目 | 規(guī)格 | 價格 |
TM104 | 分子克隆 | 樣 | 詢價 |
1、TA克?。嚎俁NA(基因組DNA)的提取→引物設(shè)計及合成→以總RNA(基因組DNA)為模板通過RT-PCR(PCR)擴增得到目的基因→將PCR產(chǎn)物和選擇好的載體連接→轉(zhuǎn)化及篩選重組子→重組子測序及結(jié)果分析。
2、亞克?。篜CR產(chǎn)物TA克隆至帶有“T”末端的載體上→將含有目的基因的質(zhì)粒采用酶切方法克隆至商品化的表達載體或改造后的特殊載體上→以質(zhì)粒為模板PCR擴增目的基因后再進行克隆。
3、定點突變:在指定位置進行堿基置換、插入或者缺失,制作變異導(dǎo)入的基因→酶消化甲基化質(zhì)粒模板,選擇突變質(zhì)粒DNA→轉(zhuǎn)化大腸桿菌,挑選轉(zhuǎn)化子進行測序鑒定。
Figure4.分析克隆流程
服務(wù)說明
(1)有效的質(zhì)粒(僅提供含有該質(zhì)粒的菌種,提取質(zhì)粒需另外收費);
(2)真實的原始實驗數(shù)據(jù);
(3)權(quán)威可靠的實驗報告:包括詳細的實驗說明,相關(guān)的酶切圖片,測序結(jié)果
1、以標(biāo)準(zhǔn)化實驗作為服務(wù)宗旨
沃登以高級的設(shè)備和技術(shù)人員作為可靠基礎(chǔ),不斷的進行方法的開發(fā)優(yōu)化,確保實驗過程的可重復(fù)性,實驗結(jié)果的可靠性與一致性。
2、一站式技術(shù)服務(wù),囊括動物、病理、細胞、分子等各學(xué)科領(lǐng)域的檢測
沃登整合了生物科研的上下游學(xué)科服務(wù),能為實驗結(jié)果提供更詳實,更可靠的數(shù)據(jù)支持,讓科研服務(wù)的質(zhì)量有質(zhì)的飛越。
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